جداسازی و همسانه سازی قطعه ی dna به منظور کاهش بیان ژن کنترل کننده آنزیم کولین مونو اکسیژناز (cmo) در گیاه آرابیدوپسیس

محیط رشد گیاه در طبیعت سامانه¬ی پیچیده¬ای از تنش های غیر ¬زیستی و زیستی است. گیاهان برای زنده ماندن در برابر تنش¬های غیر زیستی از قبیل خشکی، شوری، سرما و گرما راهکارهای مختلفی را در طول تکامل به دست آورده¬اند. یکی از این راهکارها تولید اسموپروتکتنت¬هایی مانند گلایسین بتائین است. در تولید این اسموپروتکتنت، آنزیم کولین مونواکسیژناز نقش کلیدی دارد. ثابت شده است نبود این آنزیم اولین محدودیت برای تولید گلایسین بتائین در گیاهانی است که قادر به انباشت آن نیستند. تنباکو و آرابیدوپسیس از جمله¬ی این گیاهان هستند. در توالی ژنومی گیاه آرابیدوپسیس ژن احتمالی کولین مونواکسیژناز دیده می¬شود. با هدف آگاهی از نقش ژن احتمالی کولین مونواکسیژناز و آنزیم کد شده به وسیله آن در آرابیدوپسیس، سازه¬ای برای کاهش بیان ژن پیش¬تر گفته شده طراحی و ساخته شد. به این منظور پس از استخراج آر. ان .ای و تهیه سی. دی. ان. ای. قطعه¬ای از ژن مدنظر با آغازگرهای اختصاصی طی واکنش زنجیره¬ای پلیمراز تکثیر شد. این قطعه در پلاسمید pgemt-easyدرج و سازه¬ی pgemt-atcmo-rnaiساخته شد. پلاسمید نوترکیب پس از انتقال به باکتری e.coliسویه¬ی xl1-blueهمسانه سازی شد. پس از تخلیص پلاسمید از باکتری، تعیین توالی برای قطعه مدنظر انجام شد. نتیجه حاصل از تعیین توالی قطعه جداسازی شده، با توالی طراحی شده مطابقت داشت. این سازه ابزار اصلی پژوهشگران این پروژه برای کاهش بیان ژن در پژوهش¬های آینده خواهد بود.